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血紅素鐵提取方法及原理
2022-11-24
血紅素鐵提取方法--酸性丙酮提取法
酸性丙酮提取法：使用酸性丙酮分離提取血紅素鐵的方法。
血紅素鐵提取原理：
血液中的血紅蛋白是由4分子亞鐵血紅素和1分子珠蛋白結合而成的。在pH> 3時，亞鐵血紅素與珠蛋白結合最疏松。根據(jù)此化學性質，提取時先從血液中分離出血液,然后加水將血球液溶解，調節(jié)pH至3.0左右，加入適量丙酮，可使蛋白質凝固，亞鐵血紅素則溶于丙酮液中。再加入醋酸鈉，鞣酸，稀堿或直接蒸餾，即可使血紅素鐵沉淀析出。
血紅素鐵提取工藝：
紅細胞加適量水，進行機械攪拌細胞破碎30 min后，加入紅細胞5倍體積的3%的酸性丙酮溶液，用1 mol/L的鹽酸調溶液的pH至2～3，抽提10 min，離心收集上清液，加入1 mol/L的氫氧化鈉，待進一步提取，提取方法有以下4種：
1、醋酸鈉法：加濾液量1%的醋酸鈉攪拌均勻，靜止，抽濾，取沉淀，用蒸餾水，無水乙醇，乙醚依次沖洗2次，除去雜質，干燥，回收丙酮；
2、蒸餾法：水浴回收丙酮，濾液濃縮后即產生沉淀，抽濾，干燥得到血紅素鐵成品；
3、稀堿抽提法：將酸性丙酮和血球混合液抽濾，濾液用酸性丙酮洗至淺灰色，合并濾液，用1mol/LNaOH溶液調pH至中性，析出沉淀，離心，取沉淀，用0.1 mol/L NaOH溶液溶解后離心，,取上清液，用1 mol/LHCl調pH至酸性，析出大量沉淀，離心，水洗沉淀3次至中性，干燥，得到血紅素鐵；
4、鞣酸鹽析法：向提取液中加入5%的鞣酸，攪勻靜置過夜，氯化血紅素呈針狀晶體析出，,離心收集沉淀，用蒸餾水洗滌3次，干燥后獲得氯化血紅素。